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RTE4102 DNA尿素PAGE电泳试剂盒
 产品货号: RTE4102
 产品名称: RTE4102 DNA尿素PAGE电泳试剂盒
 产品价格/规格: 10次 600元
 产品说明书: 暂无
 更新时间: 2020-09-02
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  •  DNA尿素PAGE电泳试剂盒(货号RTE4102

                     DNA Urea PAGE Electrophoresis Kit

    产品组成:

    货号

    名称

    规格

    保存条件

    AC2914

    40%PAA(29:1)

    100 ml

    4

    TB001

    5×TBE

    500 ml

    RT

    RU5080

    尿素(电泳级)

    220 g

    RT

    AP020P

    APS(干粉)

    5 ml

    RT

    (配制后-20贮存)

    TA0761

    TEMED

    0.5 ml

    4,避光

    DL080

    2×TBE尿素上样缓冲液 (尿素变性胶)

    1 ml

    4

    产品简介:

    DNA尿素 PAGE 电泳是研究寡核苷酸电泳的重要研究手段。可以检测2-500碱基的寡核苷酸片段,理论上可以分辨出相差一个核苷酸的片段。

    本公司提供的DNA尿素PAGE电泳试剂盒包含凝胶制备及电泳所需的全部试剂,用户只需自备制胶器具和蒸馏水,即可配制各种浓度的PAGE胶,使用方便。

    按照每次制备7 ml 8%凝胶计算,试剂盒可使用至少70次;按照每次制备50 ml 8%凝胶计算,试剂盒可使用10次。

    贮存和运输:

        试剂盒按照标签温度贮存,有效期一年。试剂盒常温运输。

    使用说明:

    一、制备凝胶:

    10% APS配制-5 ml

    将0.5 gAPS干粉溶于5 ml灭菌水中,彻底溶解后分装,1 ml/支,-20℃备存,每次取一管使用。10% APS应尽量减少室温存放时间,以防失效。10%APS在4℃有效期为一周,-20℃有效期6个月。若发现凝胶聚合时间延长,应考虑更换使用-20度保存的10% APS。

    8040娱乐威尼斯人 1.1.参照凝胶模具说明书,装配好凝胶模具。

    1.2.根据表格,将不同体积的成分混合,漩涡搅拌至尿素彻底溶解。

    表一 配制不同浓度凝胶所需各组分的体积(毫升) 8×10cm 1.0mm厚度)

    单链DNA长度

    最佳凝胶浓度

    尿素(克)

    40%PAA

    29:1ml

    5×TBE

    ml

    补水到总体积

    10%APS

    TEMED

    200-1000 nt

    5%

    2.94

    0.875

    1.4

    7 ml

    70 μl

    7 μl

    50-400 nt

    8%

    2.94

    1.4

    1.4

    7 ml

    70 μl

    7 μl

    30-300 nt

    10%

    2.94

    1.75

    1.4

    7 ml

    70 μl

    7 μl

    10-150 nt

    15%

    2.94

    2.625

    1.4

    7 ml

    70 μl

    7 μl


    表二 配制不同浓度凝胶所需各组分的体积(毫升) (大板胶)

    单链DNA长度

    最佳凝胶浓度

    尿素(克)

    40%PAA

    29:1ml

    5×TBE

    ml

    补水到总体积

    10%APS

    TEMED

    200-1000 nt

    5%

    21

    6.25

    10

    50 ml

    500 μl

    50 μl

    50-400 nt

    8%

    21

    10

    10

    50 ml

    500 μl

    50 μl

    30-300 nt

    10%

    21

    12.5

    10

    50 ml

    500 μl

    50 μl

    10-150 nt

    15%

    21

    18.75

    10

    50 ml

    500 μl

    50 μl

    8040娱乐威尼斯人 1.3. 在凝胶模具中灌入适量凝胶溶液,在胶的液面距离达到顶部时停止灌胶,插入梳子;常温静置30-60分钟。

    注:凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时,聚合较快;冬天气温低时,聚合时间会延长。可以根据环境温度的不同调节APS的加入量。

    1.4. 拔出梳子,1×TBE缓冲液彻底冲洗加样孔2-3次,去除残余的尿素

    二、电泳:

    2.1. 预电泳:电泳槽内外加入适量1×TBE缓冲液稳压200V预电泳30分钟。

    注:试剂盒配套的5×TBE缓冲液仅够配制凝胶用,1×TBE电泳缓冲液请自己制备,配方如下:

    8040娱乐威尼斯人 1×TBE   89 mM Tris, 89 mM boric acid, 2 mM EDTA-Na 。

    8040娱乐威尼斯人 2.2.  取 3-5 μl样品,加入等体积2×TBE尿素上样缓冲液,70℃处理5 分钟后立即冰浴,上样。

    2.3.  连接电源线,打开电源开关,按照以下条件电泳。

     

    恒电压

    起始电流

    结束电流

    电泳时间

    适用条件

    推荐电压

    200V

    15-20 mA/板胶

    10-15 mA/板胶

    60+ min

    最佳电压,最优的分辨率

    2.4.  等待上样缓冲液的溴酚蓝指示前沿到凝胶底部时终止电泳,取出凝胶进行后续实验。

    变性胶浓度

    溴酚蓝

    二甲苯菁

    5%

    35 nt

    130 nt

    8%

    19 nt

    75 nt

    10%

    15 nt

    55 nt

    15%

    10 nt

    52 nt

    三、染色:

    3.1 单链DNA可以用单链DNA PAGE电泳染色试剂盒(货号:RTS5103),核酸PAGE电泳染色试剂盒(货号:RTS5102)或核酸快速银染试剂盒8040娱乐威尼斯人(货号:RTS5101)进行染色。

    实验示例:

    1.    使用单链DNA PAGE电泳染色试剂盒(货号:RTS5103)染色:

                             

     

    2.    使用核酸PAGE电泳染色试剂盒(货号:RTS5102)染色:

                      



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