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RTR2308 RealPure植物种子RNA提取试剂盒
 产品货号: RTR2308
 产品名称: RTR2308 RealPure植物种子RNA提取试剂盒
 产品价格/规格: 50次 1200元
 产品说明书: 点击查看
 更新时间: 2020-09-02
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  • RealPure®Plant Seed RNA Extraction Kit

    RealPure®植物种子RNA提取试剂盒

    试剂盒内容及保存:

    试剂盒组成

    RTR2308-S

    5次)

    RTR2308-01

    50次)

    贮存方式

    裂解液RSL

    5 ml

    30 ml

    常温

    缓冲液PRS

    0.5 ml

    3 ml

    常温

    裂解液RL plus

    3 ml

    30 ml

    常温

    去蛋白液RD

    3 ml

    30 ml

    常温

    漂洗液RW(浓缩液)

    1.5 ml

    首次使用按照标签加入无水乙醇

    25 ml

    首次使用按照标签加入无水乙醇

    常温

    RNase-free

    1 ml

    5 ml

    4

    DNA清除柱CSRNase-free

    5

    50

    常温

    RNA吸附柱CRRNase-free

    5

    50

    常温

    收集管

    10

    100

    常温

    2 ml离心管(RNase-free

    5

    50

    常温

    1.5 ml离心管(RNase-free

    15

    150

    常温

    说明书

    1

    1

     

    储存条件和效期:

    RNase-free水4℃保存;其他试剂在常温(25℃左右)干燥条件下,可保存1年。试剂盒常温运输。

    产品简介:

    本试剂盒可从植物种子中快速提取总RNA,通过独特的裂解系统,快速去除植物组织中的淀粉、多糖等成分,释放 RNA。试剂盒配套缓冲液PRS(Phenolic Remove Solution)可以去除种子中的多糖多酚对RNA提取的影响。另外,试剂盒配套DNA清除柱,可以消除基因组DNA的污染。整个提取过程仅需20-30分钟内即可完成,可以从50 mg植物种子中提取数十微克高纯度RNA,基本没有DNA和蛋白的污染,可用于Northern blot、Dot blot、polyA 筛选、体外翻译、RNase 保护分析和分子克隆等实验。

    已经测试的植物种子有:拟南芥干种子、小麦干种子、水稻干种子、芝麻种子、玉米干种子、豌豆种子、红豆干种子、绿豆干种子、向日葵种子、西瓜种子、油莎豆、花生、大豆等。另外,该试剂盒也适合于提取块茎、鳞茎的RNA。


    准备工作:

    1操作前在裂解液RSL中加入β-巯基乙醇至终浓度5%,如500 μl RSL中加入25 μl β-巯基乙醇。此裂解液最好现用现配。配好的 RSL4 ℃可放置3天。

    2 按照标签所示在漂洗液RW中加入无水乙醇(自备),混匀后盖紧瓶盖后常温贮存备用。

    3 准备65℃水浴

    4 所有离心步骤均在常温下进行。

    操作步骤:

    1. 样品处理:

    1.1 1.5 ml RNase-free离心管中加入500 μl裂解液RSL(使用前请先检查是否已加入β-巯基乙醇),50 μl缓冲液PRS混匀备用。

       注:缓冲液PRS有助于去除样品中的多糖和多酚,禾本科植物如水稻,小麦和玉米的种子RNA提取中可以不用添加;如不能判断材料是否含多糖和多酚,请加入缓冲液PRS

    1.2将种子加入到液氮预冷的研钵中,用研杵研磨,其间不断加入液氮,直至研磨成粉末状。取20-50 mg粉末迅速加入到离心管中,涡旋剧烈震荡混匀,65℃水浴放置5分钟,间歇混匀。

    注:一定不要加入超过50 mg的粉末,否则样品超过裂解液RSL的裂解能力导致RNA提取失败。

    2. 离心取上清:

    13,000 rpm离心5 min,小心吸取收集管中的上清至1.5 ml RNase-free的离心管中,吸头尽量避免接触收集管中的细胞碎片沉淀。一般可获得400 μl上清。

    注:一些种子富含油脂如花生种子,离心后脂肪位于最上层,用吸头穿越脂肪层吸取上清;禾本科植物如水稻,小麦,玉米,高粱种子会有大量沉淀生产。

    3. 去除基因组污染:

    上清中加0.5倍体积的无水乙醇(如400 μl上清中加入200 μl无水乙醇),混匀(此时可能会出现沉淀),得到的溶液和沉淀一起转入DNA清除柱CS(清除柱放入收集管中)中,13,000 rpm离心2分钟,弃掉收集管中的废液。

    注:吸附柱的最大容积是850 μl,超过此体积分步上柱,确保全部溶液都通过过滤柱,如果膜上有残留液体,延长离心时间至5分钟,保证膜上无残留液体。

    4. 洗脱RNA

      将DNA清除柱放入2 m l RNase-free离心管中,在清除柱中加入500 μl 裂解液RL plus,13,000 rpm离心1分钟,收集滤液(注意:RNA在滤液中,不要丢弃),滤液中加入250 μl无水乙醇,此时可能会出现沉淀,立即混匀,不要离心。

    5. RNA挂柱:

      将全部溶液加入到RNA吸附柱CR中(吸附柱放入收集管中),13,000 rpm离心2分钟,弃废液。

    注:确保溶液全部过滤到收集管中,膜上无残留,如有必要,可以延长离心时间至5分钟。

    6. 去除RNA中的蛋白污染:

    向RNA吸附柱CR中(吸附柱放入收集管中)加入500 μl 去蛋白液RD,13,000 rpm离心1分钟,弃废液。

    7. 去除RNA中的其他杂质:

    向RNA吸附柱CR中加入700 μl漂洗液RW(使用前请先检查是否已加入乙醇), 13,000 rpm离心1分钟,弃废液。

    8. 进一步去除RNA中的其他杂质:

    向吸附柱CR中加入500 μl漂洗液RW (使用前请先检查是否已加入乙醇),13,000 rpm离心1

    分钟,弃废液。

    9.  关键步骤:彻底去除吸附柱上的残余乙醇:

    将吸附柱CR放回收集管中,确保盖好吸附柱管盖,13,000 rpm将吸附柱CR空甩离心2 分钟,去除吸附柱上的残余液体。

    注:此步骤目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,如果有漂洗液残留,可能会影响后续的RT等实验操作。

    10. 洗脱得到RNA

    将RNA吸附柱CR转入一个新的1.5 ml RNase-free离心管中,向吸附柱O型垫圈中央悬空加入50-100 μl RNase-free水(事先65℃预热可提高洗脱效率),盖好吸附柱管盖,常温放置2分钟,13,000 rpm离心2 分钟。

    注:确保水要加到膜的中央,不要贴壁加入;洗脱缓冲液体积不应少于50 μl,体积过小影响回收效率。

    11. RNA贮存:

    RNA样品-80℃中保存。

    RNA产量和质量的评估:

    1. RNA产量:

    用分光光度计测定OD260的吸光值来计算RNA产量。将RNA按照一定的比例稀释于TE溶液(10mMTris pH8.0,1mMEDTA)中,根据以下公式计算:

    A260×稀释倍数×40=μg RNA/ml

    注:测定OD值时,尽量不要用RNase-free水稀释RNA,因为RNase-free水pH较低,测定的OD值偏低。

    2. RNA质量:

    凝胶电泳检测:凝胶电泳中,完整的RNA应该有两条主带:28S和18S,并且28S亮度应该与18S相当或是其亮度的2倍。可以使用普通的1×TAE琼脂糖凝胶电泳,凝胶浓度1.5 %,可以使用高电压,短时间电泳,如7V/cm电泳,20分钟。建议使用D2000 DNA ladder(Cat:RTM415)作为Marker。植物28S rRNA迁移率与1500 bp类似,18S rRNA迁移率与1000bp类似。

    吸光值检测:可以用A230,A260和A280的数值表示RNA的纯度。纯净的RNA的 A260/A280比值应该为2,我们得到的RNA样品比值应在1.8-2.2之间,如果比值低于1.8,表明RNA样品中蛋白污染比较严重。

    A260/A230比值应该在2-2.2之间。如果此比值低于2,表明RNA样品中有胍盐,多糖的污染。


    实验示例:


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