8040娱乐威尼斯人

免费咨询电话: 400-699-0631      
 
 
 
产品分类
 





SP7255S Puromycin Solution 嘌呤霉素溶液
 产品货号: SP7255S
 产品名称: SP7255S Puromycin Solution 嘌呤霉素溶液
 产品价格/规格: 1ml 200元/5×1ml 800元
 产品说明书: 点击查看
 更新时间: 2020-09-02
详细信息   访问次数:次

  • 产品介绍
  • 发表文章
  • 相关产品
  • 嘌呤霉素溶液(10mg/ml)

    Puromycin Solution10mg/ml

    产品包装:

    产品编号

    产品名称

    产品包装

    说明书

    SP7255S-01

    嘌呤霉素溶液(10mg/ml)

    1×ml

    1

    SP7255S-02

    嘌呤霉素溶液(10mg/ml)

    5×1ml

    1


    Formula: C22H29N7O5·2HCl

    8040娱乐威尼斯人 MW: 544.43

    Appearance: clear solution

    产品简介:

    Puromycin是来源于Streptomyces alboniger的一种氨基核苷类抗生素,中文名为嘌呤霉素,常用于筛选能够表达pac基因(puror)的细胞。pac基因表达嘌呤霉素N-乙酰转移酶(Puromycin N-acetyl-tranferase),如果该基因表达,就会对嘌呤霉素产生抗性,这一特性目前普遍应用于筛选表达pac基因的哺乳动物稳定细胞株。目前,很多商业化的慢病毒载体都携带pac基因(一般在质粒图谱上标记为puror8040娱乐威尼斯人),可以利用嘌呤霉素的筛选,得到特定基因稳定表达的细胞株。嘌呤霉素也可以用来筛选表达pac基因的大肠杆菌菌株、酵母菌株等。Puromycin不仅能用于稳定细胞株的筛选,也用于稳定细胞株的维持。Puromycin的作用特点是快速作用于细胞,一般2天内可以杀死99%的不表达pac基因的细胞。

    本产品浓度为10mg/ml,过滤除菌,可以直接用于细胞培养。

    保存条件:

    -20℃保存,有效期12个月。避免反复冻融。

    使用方法:

    推荐工作浓度:

    推荐的作用于哺乳动物细胞的嘌呤霉素浓度一般为1-10μg/ml(表1),但最佳工作浓度需要通过剂量反应曲线来确定。

    表1.  部分常见哺乳动物细胞的推荐工作浓度表

    细胞名称

    细胞类型

    嘌呤霉素浓度

    A549

    Lung cancer

    1-2μg/ml

    B16

    Mouse melanocytes

    1-2μg/ml

    ES cell

    Human embryonic stem cells

    0.5-5μg/ml

    H1299

    Non-small cell lung carcinoma

    1-3μg/ml

    HEK293

    Human embryonic kidney

    0.5-3μg/ml

    HeLa

    Human cervical cancer

    1-2μg/ml

    HepG2

    Human hepatocellular carcinoma

    0.5-2μg/ml

    HT1080

    Human fibrosarcoma

    0.5-2μg/ml

    MCF-7

    Human breast cancer

    0.5-2μg/ml

    MDA-MB-231

    Human breast cancer

    0.5-5μg/ml

    MEF

    Mouse fibroblasts

    1-5μg/ml

    嘌呤霉素剂量反应曲线的确定(shRNA转染或者慢病毒感染为例):

    嘌呤霉素的有效筛选浓度与细胞类型、生长状态、细胞密度、细胞代谢及细胞所处细胞周期等因素相关。为了筛选到稳定表达的shRNA或感染病毒的细胞株,确定杀死未转染/感染细胞的最低浓度嘌呤霉素非常重要。对于初次使用的细胞,一般需要通过实验来确定适合自身实验体系的剂量反应曲线(dose-response curve or kill curve)。

    1.  第一天:24孔板中以5~8×104cells/孔的密度接种细胞,接种够量的孔以便进行后续的剂量梯度实验。细胞培养箱内培养过夜。

    2.  第二天: 在培养过夜后的细胞中更换新鲜配制的筛选培养基,该筛选培养基为含不同浓度嘌呤霉素的新鲜培养基(如0、 1、2.5、5、7.5、10 μg/ml等),更换培养基后在细胞培养箱中继续培养。

    8040娱乐威尼斯人 3.  第三天后:由于嘌呤霉素可以快速作用于细胞,一般2天内可以杀死99%的未表达pac基因的细胞,所以在加嘌呤霉素后的1-2天就可以进行观察细胞存活率,从而确定有效杀死正常细胞的药物最低浓度。如果细胞耐药性比较强,需要每日观察,一般4-10天内即可确定嘌呤霉素的最低浓度。

    哺乳动物稳定表达细胞株的筛选:

    转染含有pac基因的质粒或者感染含有该基因的病毒后,即可筛选稳定表达株。

    1. 细胞转染或感染48小时后,将细胞置于含有适当浓度嘌呤霉素的新鲜培养基中培养,此为处理组。 注意:当细胞处于分裂活跃期时,抗生素作用最明显。细胞过于密集,抗生素产生的效力会明显下降,所以细胞的密度最好不超过25%。建议同时做一个正常细胞的对照组。转染或感染48小时后,如果细胞过密也可以消化后重新接种细胞,培养过夜后即可进行嘌呤霉素筛选。

    2. 每隔2-3天,更换含有嘌呤霉素的培养基。

    3. 筛选7天后,对照组正常细胞应该100%死亡,处理组中存活的细胞为表达pac基因的细胞。然后根据实验目的进行多克隆或单克隆细胞的筛选。

    注意:每日进行细胞生长状态的观察。嘌呤霉素的筛选至少需要24小时,有效浓度嘌呤霉素的筛选周期一般在2-10天。

    8040娱乐威尼斯人 4. 待细胞可以稳定生长后,嘌呤霉素的浓度可以减半用于后续的培养。在得到稳定表达细胞株后,一般建议嘌呤霉素也须持续加入,并2-3天更换含有嘌呤霉素的新鲜培养液。


TOP】【打印本页】【关闭窗口



中科瑞泰(北京)生物科技有限公司 版权所有 网站管理   快递查询   IF查询
电话:010-58437227 免费电话:400-699-0631 传真:010-57909566
  内勤订货QQ:2446698252   技术支持QQ:460449375 电子邮箱:real-times@vip.163.com
注意:公司所有产品仅供科研使用
_×
在线咨询
var _hmt = _hmt || []; (function() { var hm = document.createElement("script"); hm.src = "https://hm.baidu.com/hm.js?b00abc75c9fc3bffd64d361752657c7a"; var s = document.getElementsByTagName("script")[0]; s.parentNode.insertBefore(hm, s); })();