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RTG2405 2×CTAB提取缓冲液
 产品货号: RTG2405
 产品名称: RTG2405 2×CTAB提取缓冲液
 产品价格/规格: 200ml 150元
 产品说明书: 点击查看
 更新时间: 2020-09-02
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  • 2×CTAB提取缓冲液

    ● 产品编号及规格:

    货号

    名称

    规格

    贮存

    RTG2405-01

    2×CTAB提取缓冲液

    200 ml

    RT

    BME

    还原剂

    1 ml

    RT

     

    说明书

    一份

     

    ● 产品介绍:

        CTAB (hexadecyltrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化铵),是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性。在高离子强度的溶液中(>0.7mol/L NaCl) CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物而不沉淀核酸。通过有机溶剂抽提,去除蛋白、多糖、酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。

        2×CTAB提取缓冲液成分:2%(w/v)CTAB100mM Tris (pH 8.0)20mM EDTA,1.4 MNaCl,,还原剂(随用随加)

    ● 储存条件:

       常温贮存一年。

    ● 实验操作步骤:

    DNA提取:

       1. 2×即用型CTAB提取液(现用现配)配制:

    按照终浓度0.2% (v/v)加入还原剂,如1 ml 2×CTAB提取缓冲液中加入2 μl还原剂。2×即用型CTAB提取液建议现用现配。

    2. 取0.2-0.5新鲜植物材料,于液氮中研磨成粉末。

    3. 将粉末转入预冷的1.5ml离心管中,立即加入65℃预热的0.7 ml 2×即用型CTAB提取缓冲液,65水浴30分钟,间歇混匀。

      注:CTAB溶液在低于15℃时会形成沉淀析出,因此,在将其加入冰冷的植物材料之前必须预热,且离心时温度不要低于15℃。

    4. 加入等体积的酚:氯仿:异戊醇(25:24:1),轻缓颠倒离心管混匀8-10次,常温12000 rpm 离心10分钟。

    5. 将上清液转入另一1.5ml离心管中,加入等体积酚:氯仿:异戊醇(25:24:1),颠倒离心管混匀8-10次,常温12000 rpm离心10分钟。

    6. 将上层水相转入新的1.5 ml离心管中,加入0.6倍体积的冰冷异丙醇,轻柔混匀,冰浴30分钟。

    7. 12000 rpm4℃离心10分钟。

    8. 去上清液, 加入1ml 70%乙醇漂洗沉淀,412000 rpm 3分钟,吸弃乙醇。

    9.4℃12000 rpm 1分钟,用移液器吸尽残余乙醇,超净台吹干沉淀。

    注:沉淀不能彻底干燥,否则不好溶解。

    10. 加入30-50μl的超纯水或TE缓冲液溶解DNA,-20保存备用。

    RNA提取:

    1. 2×即用型CTAB提取液(现用现配)配制:

    按照终浓度1 % (v/v)加入还原剂,如1 ml 2×CTAB提取缓冲液中加入10 μl还原剂。2×即用型CTAB提取液建议现用现配。

    2. 取50-100 mg新鲜植物材料,于液氮中研磨成粉末。

    3. 将粉末转入预冷的1.5ml离心管中,立即加入65℃预热的0.5 ml 2×即用型CTAB提取缓冲液,65水浴5-10分钟,间歇混匀。

      注:CTAB溶液在低于15℃时会形成沉淀析出,因此,在将其加入冰冷的植物材料之前必须预热,且离心时温度不要低于15℃。

    4. 加入等体积的酚:氯仿:异戊醇(25:24:1),轻缓颠倒离心管混匀8-10次,常温12000 rpm 离心10分钟。

    5. 将上清液转入另一1.5ml离心管中,加入等体积氯仿,颠倒离心管混匀8-10次,常温12000 rpm离心10分钟。

    6. 将上层水相转入新的1.5 ml离心管中,加入终浓度4 M LiCl,轻柔混匀,-20℃ 30分钟。

    7. 12000 rpm4℃离心10分钟。

    8. 去上清液, 加入1ml 70%乙醇漂洗沉淀,412000 rpm 3分钟,吸弃乙醇。

    9.4℃12000 rpm 1分钟,用移液器吸尽残余乙醇,超净台吹干沉淀。

    注:沉淀不能彻底干燥,否则不好溶解。

    10. 加入30-50μl的RNase-free水溶解RNA,-80保存备用。

     



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