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RTD9101 蛋白浓缩试剂盒
 产品货号: RTD9101
 产品名称: RTD9101 蛋白浓缩试剂盒
 产品价格/规格: 50次 300元
 产品说明书: 点击查看
 更新时间: 2020-09-02
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     TCA蛋白浓缩试剂盒(目录号:RTD9101


    试剂盒内容及保存:TCA Protein Precipitation Kit

    货号

    产品名称

    规格

    贮存

    RTD9101-01

    试剂A-沉淀溶液

    10 ml

    RT

    RTD9101-02

    试剂B-漂洗溶液

    30 ml

    RT

    RTD9101-03

    试剂C-助沉剂

    5 ml

    RT

    RTD9101-04

    试剂D-中和液

    250 μl

    RT

    RTD9101-05

    1 M NaCl

    1 ml

    RT

    RTD9101-06

    1×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(变性,还原)

    1 ml

    -20℃

    RTD9101-07

    40 mM碳酸钠

    1 ml

    RT

     

    说明书

    1

     

    储存条件和效期:

    试剂盒常温运输;收到后,按照标签温度贮存;本试剂盒有效期1年。

    产品简介:

    试剂盒原理:在酸性条件下,三氯乙酸(Trichloroacetic acid,TCA)与蛋白质形成不溶性盐,使蛋白质变性导致构象发生改变,蛋白暴露出较多的疏水性基团,蛋白发生聚集而沉淀。为了避免TCA对后续电泳的影响,沉淀的蛋白要使用洗涤液彻底清洗去除TCA。浓缩后的蛋白可以用于SDS-PAGE和Western blot 前的蛋白样品处理。

    以每次浓缩800 μl蛋白样品计算,本试剂盒可以使用40-45次。

    操作方法:

    1.  准备1.5 ml干净的离心管,加入800 μl蛋白样品溶液。

    可选:如果样品溶液中离子强度低于10mM,补加8 μl的1M NaCl溶液。

    低于800 μl的样品,加入8 μl 1M NaCl,用水补齐体积至800 μl,使NaCl终浓度为10mM。

    2. 加入80 μl 试剂C-助沉剂,混匀,常温静置15分钟。

    注:加入试剂C后溶液变浑浊。

    3.  加入步骤2溶液1/4体积的试剂A -220 μl,涡旋震荡10-30秒,使之充分混匀。

    4.  冰浴放置15分钟。

    5. 4℃,12000 rpm(13000 g)离心10 分钟。 注:离心后白色蛋白沉淀弥散性可见于离心管管壁上。

                       左为加入助沉剂;右没有加入助沉剂

    6.  小心去掉上清液,保留沉淀。

    注:请小心操作,可以用移液器辅助彻底吸弃上清。

    7.  沉淀中加入600 μl试剂B,涡旋震荡10-30秒,彻底混匀。

       注:试剂B有刺激性气味,请在通风橱内操作。

    8.  冰浴15分钟。

    9. 4℃,12000 rpm(13000 g) 离心10分钟;在通风橱中,倒掉上清。残留上清用10 μl吸头彻底吸弃,沉淀物通风晾干30-60秒。注:沉淀不能过分干燥,否则将导致蛋白不好溶解。

    10. 蛋白溶解:

    根据下表选择溶解缓冲液:

    下游实验

    溶解缓冲液

     

    备注

    SDS-PAGE电泳

    1×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(变性,还原)

    试剂盒提供

    加入溶解缓冲液后,彻底溶解沉淀(37℃温浴处理),溶液正常颜色应为蓝色;如果溶液为淡绿色或黄色,加入1/10体积中和液D,使颜色变回蓝色。 95℃ 处理5分钟,电泳上样

    BCA蛋白定量

    40mM 碳酸钠pH11.25

    试剂盒提供

    BCA蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度

    等电聚焦IEF/2D电泳

    7M尿素,2M硫脲,40mM Tris1%C7B2O1% ASB-14 pH10.4

    试剂盒不提供

     

    酶切实验

    100 mM碳酸氢铵 pH8.5

    试剂盒不提供

     

    实验示例:



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