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Bradford蛋白浓度测定试剂盒(去垢剂还原剂兼容型)
 产品货号: RTP 7104
 产品名称: Bradford蛋白浓度测定试剂盒(去垢剂还原剂兼容型)
 产品价格/规格: 60次/1000次 300元
 产品说明书: 暂无
 更新时间: 2020-09-02
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    Bradford蛋白浓度测定试剂盒(去垢剂还原剂兼容型)


    试剂盒内容及保存:

    货号

    产品名称

    包装

    贮存方式

    RTP7104-01

    考马斯亮蓝G-250 plus染色液

    200 ml

    4

     

    牛血清白蛋白(BSA)标准溶液(5 mg/ml

    2×1 ml

    -20

     

    PBS溶液

    10 ml

    4

     

    说明书

    1

     

    储存条件和效期:

    考马斯亮蓝G-250染色液4℃避光保存;牛血清白蛋白标准溶液-20℃贮存。PBS溶液4℃贮存。本试剂盒有效期1年。

    产品简介:

    Bradford蛋白质浓度测定试剂盒(去垢剂还原剂兼容型)是根据考马斯亮蓝G-250(Coomassie brilliant blue G-250)法研制而成,其原理是考马斯亮蓝G-250在酸性条件下和蛋白质结合,使得染料最大吸收峰从465nm变为595nm,在一定的线性范围内,反应液595nm处吸光度的变化量与反应蛋白量成正比,测定595nm处吸光度的增加即可进行蛋白定量。该产品经过配方优化,兼容一定浓度的还原剂和去垢剂。

    每个试剂盒可以检测1000个样品(使用微孔板)或60个样品(使用试管)

    产品特点:

    1. 检测速度极快,10个样品只需不足10分钟即可完成。

    2. 灵敏度高,检测浓度下限可达25μg/ml (测定浓度范围在50-1000μg/ml内有较好的线性关系),最小检测蛋白量可达0.5μg。

    3. 该试剂盒测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响。样品中β-巯基乙醇的浓度可高达1M,DTT的浓度可高达50 mM。同时,此方法测定蛋白浓度可以兼容受高浓度的去垢剂影响,可以适用于膜蛋白样品的浓度测定。蛋白样品中SDS浓度低于0. 1%,Triton X-100浓度低于1%,Tween 20, 60, 80浓度低于1%,NP-40浓度低于1%都可以定量。

    操作方法

    微孔板测定程序:(工作范围25-1000 μg/ml

    1.  G-250染液在使用前应平衡温度至室温并温和颠倒混匀;

    2.  1mg/ml蛋白标准品配制:室温完全溶解蛋白标准品,取20μl 5mg/ml BSA蛋白标准溶液,加入80μl PBS溶液,使其终浓度为1 mg/ml

    3.  按照下表配制BSA标准测定溶液:

    4.   

    编号

    0

    1

    2

    3

    4

    5

    6

    7

    8

     

    1 mg/ml BSA 标准溶液 μl

    BSA标准溶液 μl

    0

    0.5

    1.5

    2.5

    5.0

    7.5

    10

    15

    20

    PBS 溶液 μl

    20

    19.5

    18.5

    17.5

    15

    12.5

    10

    5

    0

    BSA终浓度 μg/ml

    0

    25

    75

    125

    250

    350

    500

    750

    1000

    总体积 μl

    20 μl

    5.  将适当体积的待测样品加入到微孔板中,并用PBS补足到20 μl

    6.  向微孔板中加入200 μl G-250染色液,混匀,室温放置3-5分钟;

    7.  测定595 nm 处的吸光值,并记录读数;以不含BSA 的样品的光吸收值作为空白对照。

    8.  A595为纵坐标,BSA含量为横坐标,绘制标准曲线,计算样品中的蛋白浓度。如果所得到的蛋白浓度不在标准曲线范围内,请稀释样品后重新测定。

    试管测定程序:(工作范围25-1000 μg/ml

    1. G-250染液在使用前应平衡温度至室温并温和颠倒混匀;

    2. 1mg/ml蛋白标准品配制:室温完全溶解蛋白标准品,取100 μl 5mg/ml BSA蛋白标准溶液,加入400 μl PBS溶液,使其终浓度为1.0 mg/ml

    3. 按照下表配制BSA标准测定溶液:

    编号

    0

    1

    2

    3

    4

    5

    6

    7

    8

     

    1 mg/ml BSA 标准溶液 μl

    BSA标准溶液 μl

    0

    2.5

    7.5

    12.5

    25

    35

    50

    75

    100

    PBS 溶液 μl

    100

    97.5

    92.5

    87.5

    75

    65

    50

    25

    0

    BSA终浓度 μg/ml

    0

    25

    75

    125

    250

    350

    500

    750

    1000

    总体积 μl

    100 μl

    4. 将适当体积的待测样品加入到试管中,并用PBS补足到100 μl

    5. 向试管中加入2 ml G-250染色液,混匀,室温放置3-5分钟;

    6. 测定595 nm 处的吸光值,并记录读数;以不含BSA 的样品的光吸收值作为空白对照。

    7. A595为纵坐标,BSA含量为横坐标,绘制标准曲线,计算样品中的蛋白浓度。如果所得到的蛋白浓度不在标准曲线范围内,请稀释样品后重新测定。


      References

    1.Bradford, M.M. (1976). A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Anal. Biochem. 72:248-54.


    实验示例:


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